維生素D（VD）是維持人體鈣磷代謝平衡的關(guān)鍵營養(yǎng)素，其缺乏可導(dǎo)致兒童佝僂病和成人骨質(zhì)軟化癥。食品中VD主要以VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇）形式存在，兩者結(jié)構(gòu)高度相似（僅側(cè)鏈雙鍵位置不同），傳統(tǒng)HPLC（一維）難以實(shí)現(xiàn)完全分離，易導(dǎo)致定量誤差。本文基于EClassical 3200 HPLC/3200L UHPLC構(gòu)建二維液相色譜系統(tǒng)（2D-LC），結(jié)合GB 5009.296-2023《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素D的測(cè)定》（第二法）要求，實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中VD2和VD3的高效、精準(zhǔn)檢測(cè)。

2D-LC，突破傳統(tǒng)HPLC（一維）分離瓶頸

與傳統(tǒng)HPLC的對(duì)比

工作流程

測(cè)定維生素D的2D-LC流程如下圖所示。利用KromStation色譜工作站實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)自動(dòng)化分析。

流程說明：

① 除雜質(zhì)：樣品進(jìn)入一維柱，非目標(biāo)組分排至廢液

② 富集：閥切換至富集柱，捕獲目標(biāo)VD組分。

③ 分析：目標(biāo)組分轉(zhuǎn)移至二維柱，實(shí)現(xiàn)VD2/VD3分離。

方法優(yōu)勢(shì)

在線凈化：一維柱可充當(dāng)凈化柱，去除蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，替代繁瑣的液液萃取/固相萃取。

中心切割技術(shù)：精準(zhǔn)轉(zhuǎn)移目標(biāo)窗口（20.2–21.5 min），避免非目標(biāo)組分干擾。

自動(dòng)化分析：KromStation色譜工作站控制下，通過切換閥自動(dòng)完成富集、轉(zhuǎn)移與分離，減少人為誤差。

色譜條件

方法性能驗(yàn)證

分離效果

2D-LC的一維中僅出現(xiàn)一個(gè)VD峰，表明VD2 與VD3并沒有被分開；而在二維中，VD2和VD3的色譜峰有著良好的基線分離。

VD一維色譜圖

VD二維色譜圖（兩個(gè)色譜峰分別為VD2 與VD3）

方法精密度（n=7）

與國標(biāo) GB 5009.296-2023的符合性分析

GB 5009.296-2023 第二法“在線柱切換-二維液相色譜法”明確要求：

_{1、需采用二維色譜系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)VD2與VD3的分離，分離度≥1.5。}

2、方法精密度（RSD）應(yīng)≤5%。

3、需具備在線凈化與富集功能，減少前處理誤差。

依利特方案完全滿足上述要求。

1、分離度（1.809~2.121）優(yōu)于國標(biāo)閾值，確保定性準(zhǔn)確性。

2、保留時(shí)間與峰面積 RSD 均低于國標(biāo)限值，重復(fù)性穩(wěn)定。

3、在線閥切換與富集功能符合標(biāo)準(zhǔn)中“自動(dòng)化凈化”要求，與國標(biāo)規(guī)定的技術(shù)路線一致。

結(jié)論

_{依利特二維液相色譜系統(tǒng)成功解決了食品基質(zhì)中VD2/VD3同分異構(gòu)體的分離難題。該方案在嬰幼兒配方食品、乳制品等VD強(qiáng)化食品檢測(cè)中具有重要應(yīng)用價(jià)值，為食品安全監(jiān)管提供可靠技術(shù)支撐。}